Ποια είναι η μεγαλύτερη διαφορά μεταξύ του CRISPR / Cas9 και των προηγούμενων τεχνικών;


Απάντηση 1:

Εξαρτάται από ποιες προηγούμενες τεχνικές αναφέρεστε, αλλά ο λόγος για τον οποίο το CRISPR / Cas9 είναι τόσο πρωτοποριακό είναι ότι μπορείτε να επεξεργαστείτε το γονιδίωμα όπως εσείς επιθυμείτε στοχεύοντας σε μια συγκεκριμένη περιοχή με τη δυνατότητα ανάλυσης τόσο υψηλού όσο ένα μόνο νουκλεοτίδιο ανάπτυξη). Είναι πραγματικά η ιδιαιτερότητα του κατευθυντήριου RNA που είναι συμπληρωματικό του ενδιαφέροντος DNA που καθιστά το CRIPSR / Cas9 ένα εξαιρετικό εργαλείο.

Εάν θέλετε περισσότερες λεπτομέρειες, δείτε παρακάτω -

Από το ευρύ ινστιτούτο (γνωστό για την ανάπτυξη του CRIPSR / Cas9):

Ερωτήσεις και απαντήσεις σχετικά με το CRISPR

Ε: Πώς συγκρίνεται το CRISPR-Cas9 με άλλα εργαλεία επεξεργασίας του γονιδιώματος;

A: Το CRISPR-Cas9 αποδεικνύεται μια αποτελεσματική και προσαρμόσιμη εναλλακτική λύση σε άλλα υπάρχοντα εργαλεία επεξεργασίας γονιδιώματος. Δεδομένου ότι το ίδιο το σύστημα CRISPR-Cas9 είναι ικανό να κόβει τους κλώνους DNA, τα CRISPR δεν χρειάζεται να συνδυάζονται με ξεχωριστά ένζυμα διάσπασης όπως κάνουν και άλλα εργαλεία. Μπορούν επίσης εύκολα να συνδυαστούν με εξατομικευμένες "οδηγούς" αλληλουχίες RNA (gRNA) σχεδιασμένες να τους οδηγήσουν στους στόχους DNA τους. Δεκάδες χιλιάδες τέτοιων ακολουθιών gRNA έχουν ήδη δημιουργηθεί και είναι διαθέσιμες στην ερευνητική κοινότητα. Το CRISPR-Cas9 μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για την στόχευση πολλαπλών γονιδίων ταυτόχρονα, το οποίο είναι ένα άλλο πλεονέκτημα που το θέτει εκτός από άλλα εργαλεία επεξεργασίας γονιδίων.

Το CRISPR-Cpf1 διαφέρει με διάφορους σημαντικούς τρόπους από το προηγουμένως περιγραφόμενο Cas9, με σημαντικές συνέπειες για την έρευνα και τη θεραπευτική.

Πρώτον: Στην φυσική του μορφή, το ένζυμο κοπής ϋΝΑ Cas9 σχηματίζει ένα σύμπλεγμα με δύο μικρά RNA, και τα δύο απαιτούνται για τη δραστηριότητα κοπής. Το σύστημα Cpf1 είναι απλούστερο στο ότι απαιτεί μόνο ένα RNA. Το ένζυμο Cpf1 είναι επίσης μικρότερο από το πρότυπο SpCas9, καθιστώντας ευκολότερο να μεταφερθεί σε κύτταρα και ιστούς.

Δεύτερον, και ίσως το πιο σημαντικό: το Cpf1 κόβει το DNA με διαφορετικό τρόπο από το Cas9. Όταν το σύμπλεγμα Cas9 κόβει το DNA, κόβει και τα δύο σκέλη στο ίδιο σημείο, αφήνοντας «αμβλύ άκρα» που συχνά υποβάλλονται σε μεταλλάξεις καθώς επανενώνονται. Με το σύμπλοκο Cpf1 οι αποκοπές στις δύο έλικες αντισταθμίζονται, αφήνοντας μικρές προεξοχές στα εκτεθειμένα άκρα. Αυτό αναμένεται να βοηθήσει με την ακριβή εισαγωγή, επιτρέποντας στους ερευνητές να ενσωματώσουν ένα κομμάτι DNA πιο αποδοτικά και με ακρίβεια.

Τρίτον: το Cpf1 κόβει πολύ μακριά από την περιοχή αναγνώρισης, πράγμα που σημαίνει ότι ακόμα και αν το στοχευόμενο γονίδιο μεταλλαχθεί στην περιοχή κοπής, είναι πιθανό να εξακολουθεί να ανακατεύεται, επιτρέποντας πολλαπλές ευκαιρίες για σωστή επεξεργασία.

Τέταρτον, το σύστημα Cpf1 παρέχει νέα ευελιξία στην επιλογή τοποθεσιών στόχων. Όπως το Cas9, το σύμπλεγμα Cpf1 πρέπει πρώτα να συνδεθεί με μια σύντομη ακολουθία γνωστή ως PAM και πρέπει να επιλεγούν στόχοι που είναι δίπλα σε φυσικές ακολουθίες ΡΑΜ. Το σύμπλοκο Cpf1 αναγνωρίζει πολύ διαφορετικές ακολουθίες PAM από εκείνες του Cas9. Αυτό θα μπορούσε να είναι ένα πλεονέκτημα στη στόχευση ορισμένων γονιδιωμάτων, όπως στο παράσιτο της ελονοσίας, καθώς και στους ανθρώπους.

Μια αποτελεσματική CRISPR επεξεργασίας με μονό νουκλεοτίδιο | GEN Γενετική Μηχανική & Βιοτεχνολογία Νέα - Βιοτεχνολογία από πάγκο σε επιχείρηση | GEN